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Isolement des cellules mononucléaires du sang périphérique

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Isolement des cellules sanguines

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Vous avez peur que ça ne marche pas ? Pas besoin, après des mesures sur le terrain, l'effet est illustré dans la figure ci-dessous.

Vous craignez que l'image soit fausse ? Nous n'en avons pas besoin. Nous pouvons le faire sur place. Les cellules mononucléaires du sang périphérique humain ont été isolées à partir du sang périphérique. Les cellules mononucléaires du sang périphérique (PBMC) sont des cellules mononucléaires du sang périphérique, notamment des lymphocytes et des monocytes.

La gravité spécifique des cellules mononucléaires (lymphocytes et monocytes) dans le sang périphérique se situe entre 1,075 et 1,090, celle des érythrocytes et des granulocytes entre 1,092 et 1,030 à 1,035, de sorte qu'une solution dont la gravité spécifique se situe entre 1,075 et 1,092, qui est presque isotonique, peut être utilisée pour la centrifugation en gradient de densité. Les cellules d'une certaine proportion sont séparées selon la distribution correspondante du gradient de densité.

Les exigences de base pour les milieux séparés sont les suivantes :

(1) non-toxique pour les cellules

② isotonique de base

③ insoluble dans le plasma et les substances séparées

④ Il existe une gravité spécifique.

La solution de séparation Ficoll (deux parties de solution d'eau distillée à 6 % de polysaccharose mélangées à une partie de solution saline normale à 34 % de panditumine) était la solution conventionnelle de séparation des lymphocytes avec une gravité spécifique de 1,077 ±0,002, qui était principalement utilisée pour l'isolement des cellules mononucléaires du sang périphérique.

Étapes de séparation

1. Prendre du sang total frais anticoagulant et utiliser un tube de centrifugation de 15ml

2. Ajouter une quantité appropriée de liquide de séparation dans le tube de centrifugation et le diluer 1:1 pour obtenir une solution de 10ml.

3. Mettre le tube dans une centrifugeuse à basse vitesse avec un rotor horizontal de 800xg et centrifuger pendant 20min

Après centrifugation, il y aura une stratification évidente : la couche supérieure est la couche de plasma dilué, le milieu est la couche de liquide de séparation transparent, la membrane blanche entre le plasma et le liquide de séparation est la couche de cellules mononucléaires, et le fond du tube de centrifugation est le globule rouge et le granulocyte.

La centrifugeuse à basse vitesse Kecheng vous permet de l'utiliser facilement !