Comment obtenir des coupes de paraffine de haute qualité ?

Ce texte vous fournira les méthodes détaillées de coupe de sections qualifiées en paraffine.

La coupe en paraffine est la méthode la plus fréquemment utilisée pour la préparation des coupes histologiques. Cependant, nous rencontrons souvent certaines questions lors de la coupe des tissus inclus dans la paraffine : pourquoi le bloc de cire ne peut-il pas être coupé en douceur ? Pourquoi les sections se cassent-elles et s'enroulent-elles facilement pendant la coupe ? Pourquoi les sections ne peuvent-elles pas être aplaties pendant l'étalement ? Ce texte vous fournira les méthodes détaillées de coupe de sections de paraffine qualifiées.

Fixation correcte

Après la séparation des tissus, il est nécessaire de les fixer dans un délai d'une heure.

Le liquide stationnaire doit être de 4 à 10 fois le volume du tissu et avoir une concentration précise. Un liquide trop riche et trop fin affectera la forme du tissu et l'effet de fixation. En cas de découverte d'une détérioration du liquide stationnaire, telle qu'une précipitation blanche du liquide formaldéhyde, il est nécessaire de procéder à un remplacement immédiat.

La température de fixation doit être de 35-37°C, soit la température ambiante, soit celle d'un appareil de traitement des tissus entièrement fermé. Une température trop élevée accélère l'autolyse des tissus et leur contraction excessive et détruit l'antigène et l'ADN des cellules.

Le temps de fixation ne doit pas dépasser 40 heures et doit être ajusté en fonction de la température ambiante et des spécimens.

Déshydratation appropriée

La clé de la déshydratation est de faire correspondre le temps de déshydratation de l'alcool à faible concentration avec le temps de déshydratation de l'alcool à forte concentration. L'alcool à faible concentration peut réduire la rétraction des tissus et les rendre plus faciles à couper. L'alcool à forte concentration peut déshydrater encore plus les tissus.

En général, le temps de déshydratation des spécimens (35°C) est de 1,5 heure pour l'alcool à 75 %, 2 heures pour l'alcool à 85 %, 1,5 à 2 heures pour l'alcool à 95 % (deux fois) et 1,5 à 2 heures pour l'alcool pur (deux fois). Le temps de déshydratation des petits spécimens est peu différent de celui des grands spécimens. Normalement, il n'est pas nécessaire de les séparer (souvent, la fragilité des petits spécimens est due à l'emballage en papier épais ou au fait qu'ils collent les uns aux autres, ce qui entraîne une déshydratation incomplète des tissus. Si le temps presse, il est permis de raccourcir correctement le temps de déshydratation. La durée de la déshydratation est étroitement liée à la température ambiante, à l'épaisseur et au type de tissu, au degré de fixation du tissu, etc.)

La rigueur de la déshydratation est directement associée à la transparence des tissus. Si la température est trop élevée (au-delà de 50°C) ou si de l'acétone est utilisée pendant la déshydratation, cela peut facilement conduire à une rétraction excessive des tissus et à des tissus durcis et fragiles. Il y a trois raisons à la fragilité des tissus causée par la déshydratation des tissus :

Fausse fragilité : en raison d'une déshydratation insuffisante, la paraffine ne peut pas pénétrer dans les tissus lorsque ceux-ci sont immergés dans la cire. Si les tissus sont "cuits" à haute température, ils deviendront durs et cassants. Les coupes auront des parties poudreuses ou filamenteuses. Les tissus durs tels que le léiomyome utérin auront également des bords, et la section entière s'effondrera vers l'extérieur dans le pire des cas. Les tissus présentant une déshydratation gravement insuffisante deviennent mous et ont même de l'eau.

Points de fonctionnement de la section de paraffine

Avant de sectionner, serrez la tige ou la vis de blocage correspondante sur le microtome, sinon vous risquez de sauter des sections et d'obtenir des sections d'épaisseur inégale.

Grattez la paraffine restante autour de la boîte d'enrobage, sinon le serrage de l'échantillon peut être lâche, ce qui affecte la qualité de la coupe.

Coupez correctement le bloc et effectuez d'abord une coupe grossière. L'épaisseur est d'environ 15-30 microns, et les tissus plus durs ou plus petits doivent être plus fins. Après avoir effectué un parage grossier jusqu'à ce que tous les tissus soient exposés, un parage fin peut être effectué.

Le mode de congélation du bloc de paraffine est sélectionné, et la glacière est supérieure à la table de congélation. Utilisez une glacière pour mouiller les blocs de paraffine en ajoutant de l'eau. Elle présente les avantages suivants : vitesse de congélation rapide, petite taille, faible coût d'utilisation et pas d'alimentation électrique externe.

Pendant la coupe de la paraffine, tenez délicatement le volant avec une force régulière et douce, et l'agitation ne doit pas être trop rapide ou trop lente. Si la vitesse est trop élevée, l'épaisseur de la section sera inégale et il sera difficile d'élargir la section. Si la vitesse est trop faible, la section s'épaissit. Les sections doivent être complètes, fines et régulières.

Après le sectionnement à la paraffine, mettez d'abord la section dans de l'eau froide, puis passez-la dans de l'eau chaude, afin que la section soit plus fine, avec moins de plis et de bulles. La température de l'eau de la tranche doit être comprise entre 42 et 55°C, ce qui correspond au point de fusion de la paraffine d'enrobage. Si la température de l'eau est trop élevée, les tissus et les cellules se disperseront. Si la température de l'eau est trop basse, les rides des sections ne peuvent pas être aplaties.