Approches courantes de la centrifugation en laboratoire

Cet article vous fournira les approches courantes de la centrifugation en laboratoire

La centrifugation des cellules est une étape indispensable dans les expériences courantes sur les cellules. Elle permet aux échantillons adhérents de se déposer complètement au fond du tube et aide à confirmer la concentration des cellules. Les échantillons centrifugés peuvent être utilisés pour des expériences ultérieures telles que la culture de cellules primaires, la culture de passages cellulaires, le séquençage unicellulaire, etc.

Différentes approches de séparation par centrifugation doivent être adoptées en fonction du type de cellules et d'organites.

Quelles sont donc les approches courantes pour la centrifugation des cellules ?

01 Centrifugation différentielle

La centrifugation différentielle sépare les particules de tailles et de formes différentes dans le mélange hétérogène en fonction de la vitesse de sédimentation des particules tout en augmentant progressivement la force centrifuge. Elle est généralement utilisée pour la séparation d'échantillons de laboratoire, tels que les organites - mitochondries, chloroplastes, protéines et virus.

Étapes de séparation

Étape 1 : Réglez une vitesse relativement faible pour permettre aux particules de haute densité de se déposer au fond du tube, tandis que les particules de taille moyenne et petite du mélange sont encore en suspension dans le surnageant.

Étape 2 : Collectez le sédiment. Le surnageant résultant de l'étape 1 pourrait être centrifugé à une vitesse plus élevée pour séparer les particules de taille relativement moyenne ou petite et ainsi de suite.

02 Centrifugation à gradient de densité

La centrifugation en gradient de densité, également appelée centrifugation zonale, comprend la centrifugation zonale de vitesse et la centrifugation isodensité.

1. Centrifugation zonale

La centrifugation zonale est généralement utilisée pour séparer des cellules ou des organites ayant des densités similaires mais des tailles différentes. Chargez d'abord le milieu de gradient de densité, comme le saccharose, la glycérine, le CsCl et le Percoll, dans le tube de centrifugation. Une chose à noter est que la densité des particules de l'échantillon doit être supérieure à la densité de n'importe quel point de la colonne de liquide du gradient. Étant donné que les particules séparées ont des vitesses de sédimentation différentes dans le gradient liquide, les différents composants de l'échantillon mélangé peuvent former leurs zones respectives à différentes positions de la colonne de gradient liquide, la séparation est donc réalisée pendant la centrifugation.

2. Centrifugation isodensité

La centrifugation isodensité est appliquée pour séparer des particules de densité différente. Avec une force centrifuge et un temps suffisants, les cellules ou les organites peuvent se déposer ou flotter sur le milieu de même densité dans un milieu à gradient continu. La séparation est obtenue lorsque les cellules restent et atteignent l'équilibre. Le Percoll est largement adopté comme milieu, tandis que le CsCl, le Cs2SO4 et la triiodoformyl-glucosamine peuvent également produire des gradients stables après une longue centrifugation.

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