Protocole de différentes méthodes d'injection intracrânienne

Dans le domaine de la recherche scientifique fondamentale sur le cerveau, l'injection stéréotaxique intracrânienne est le moyen le plus direct d'obtenir une injection précise dans les régions cérébrales cibles, et est devenue une partie importante de

Combiné à la fibre optique correspondante, il permet également une stimulation optique ou un enregistrement du signal neuronal de la région cérébrale cible pendant ou après l'injection. Cette méthode est largement adoptée dans les modèles animaux de maladies neurologiques humaines, les fonctions cérébrales avancées, les émotions, la cognition et d'autres études connexes.

L'injection stéréotaxique intracrânienne est généralement appliquée en administration unique et en administrations multiples. Au cours de l'expérience, la méthode appropriée peut être choisie en fonction de la fréquence d'injection, du moment d'apparition et de la durée d'action. Dans cet article, nous détaillerons ces deux méthodes, y compris les SOP et les conseils.

SOP d'administration unique crânienne

1 Instruments

Appareil stéréotaxique

Appareil d'anesthésie pour animaux de laboratoire

Micro pousse-seringue

Extracteur de micropipettes

2 Processus et procédure

2.1 Anesthésie animale préopératoire

Allumez la machine d'anesthésie animale. Placez le rat dans la boîte d'induction pour effectuer une anesthésie induite. Une fois que le rat est sous anesthésie, sortez-le de la boîte à induction et transférez-le sur le masque d'anesthésie à l'instrument stéréotaxique avec un coussin chauffant. Appliquez une pommade oculaire [XY1] sur leurs yeux et préparez la peau.

2.2 Fixer le crâne

2.2.1 Placez l'incisive du rat dans le trou du masque et vissez doucement le pince-nez.

2.2.2 Déplacez la barre d'oreille d'un côté dans la position appropriée et vissez-la en place. Tenez doucement la tête du rat et alignez la position du grand foramen occipital du même côté de la tête avec la pointe de la barre d'oreille, et poussez lentement l'autre côté de la barre d'oreille vers le grand foramen occipital.

2.2.3 Ajustez la position des barres d'oreille des deux côtés jusqu'à ce que les lectures des côtés gauche et droit soient identiques.

2.3 Percer un trou sur le crâne

(2.3.1) Fixez la micro perceuse sur l'instrument stéréotaxique cérébral avec le support de micro perceuse et déplacez lentement la micro perceuse pour toucher le Bregma et définissez zéro sur l'affichage numérique. Déplacez lentement la micro perceuse pour toucher la Lambda afin d'enregistrer la valeur de DV. Si la valeur absolue est inférieure à 0,03 mm, le crâne peut être considéré en position horizontale ; si elle est supérieure à 0,03 mm, la hauteur de l'adaptateur doit être ajustée et les positions de Bregma et Lambda doivent être recalibrées jusqu'à ce que la valeur absolue de Lambda DV soit inférieure à 0,03 mm.

2.3.2 Déplacez le foret crânien au point médian de la ligne Bregma et Lambda et élargissez les côtés gauche et droit de 0,3 mm. Touchez doucement la surface crânienne et enregistrez les valeurs DV craniofaciales aux points gauche et droit respectivement. Si la différence absolue est inférieure à 0,03 mm, le crâne peut être considéré en position horizontale ; si elle est supérieure à 0,03 mm, la hauteur des deux barres d'oreille doit être ajustée jusqu'à ce que la différence absolue soit inférieure à 0,03 mm.

2.3.3 Déplacez lentement la perceuse crânienne au-dessus du site cible. Allumez la perceuse crânienne, puis abaissez lentement la perceuse crânienne tout en observant le foret sous le microscope jusqu'à ce qu'il atteigne la dure-mère.

2.4 Injection intracrânienne

2.4.1 Utilisez le capillaire en verre pour tirer le capillaire en verre en vous référant aux paramètres du programme d'injection.

2.4.2 Utilisez une aiguille de remplissage pour remplir le capillaire en verre avec de l'huile minérale et effleurez le capillaire en verre jusqu'à ce que les bulles à l'extrémité soient évacuées.

2.4.3 Desserrez le mandrin de la pompe d'injection de la micropipette pour pousser doucement le capillaire en verre vers le haut, puis serrez le mandrin.

2.4.4 Réglez les paramètres de vitesse de vidange et de volume de vidange dans l'unité de commande et cliquez sur pour exécuter la vidange.

2.4.5 Immerger l'embout capillaire dans la solution à injecter. Définissez les paramètres de vitesse de remplissage et de volume de remplissage dans l'unité de commande et cliquez sur pour effectuer le remplissage.

2.4.6 Fixer la pompe d'injection de la micropipette sur le bras de commande. Après avoir réinitialisé la pointe capillaire à zéro, déplacez le bras d'exploitation au-dessus du site cible et descendez lentement vers la région cérébrale cible.

2.4.7 Définissez les paramètres de vitesse et de volume d'injection dans l'unité de contrôle et cliquez sur pour exécuter l'injection.

2.4.8 Après l'injection, déplacez lentement la pompe d'injection de la micropipette vers le haut jusqu'à ce que la pointe du capillaire en verre soit retirée du tissu cérébral.

2.5 Sutures

2.5.1 Suturer le cuir chevelu avec une suture stérile, puis appliquer la pommade oculaire à l'érythromycine pour prévenir l'inflammation de la plaie.

2.6 Soins post-chirurgicaux

2.6.1 Gardez le rat au chaud pendant 24 h après la chirurgie. Injectez de la pénicilline ou d'autres antibiotiques pour prévenir l'infection et fournissez au rat une alimentation et une eau potable adéquates.

3 conseils

3.1 Une fois que la pointe du capillaire en verre atteint le site cible, maintenez le capillaire au site d'injection pendant 1 min afin d'équilibrer la pression d'air avant l'injection.

3.2 Afin que le réactif d'injection soit entièrement absorbé par le tissu cérébral, arrêtez l'injection pendant 15 à 20 minutes après l'injection, puis retirez le capillaire en verre.

3.3 Afin de réduire les fuites de réactifs sur la trajectoire mobile du capillaire en verre, il est suggéré de contrôler la vitesse d'entrée et de sortie de l'aiguille à 0,01 mm/s.

SOP d'administration multiple crânienne

1 Instruments

Appareil stéréotaxique

Canule d'administration de médicaments

Micro pousse-seringue

2 Processus et procédure

2.1 Anesthésie animale préopératoire

2.1.1 Allumez la machine d'anesthésie animale. Placez le rat dans la boîte d'induction pour effectuer une anesthésie induite. Une fois que le rat est sous anesthésie, sortez-le de la boîte à induction et transférez-le sur le masque d'anesthésie à l'instrument stéréotaxique avec un coussin chauffant. Appliquez une pommade oculaire sur leurs yeux et rasez la peau de leur tête pour la préparation.

2.2 Fixer le crâne

2.2.1 Placez l'incisive du rat dans le trou du masque et vissez doucement le pince-nez.

2.2.2 Déplacez la barre d'oreille d'un côté dans la position appropriée et vissez-la en place. Tenez doucement la tête du rat et alignez la position du grand foramen occipital du même côté de la tête avec la pointe de la barre d'oreille, et poussez lentement l'autre côté de la barre d'oreille vers le grand foramen occipital.

2.2.3 Ajustez la position des barres d'oreille des deux côtés jusqu'à ce que les lectures des côtés gauche et droit soient identiques.

2.3 Mise à niveau du crâne

2.3.1 Fixez la micro perceuse sur l'instrument stéréotaxique cérébral avec le support de micro perceuse et déplacez lentement la micro perceuse pour toucher le Bregma et réglez zéro sur l'affichage numérique. Déplacez lentement la micro perceuse pour toucher la Lambda afin d'enregistrer la valeur de DV. Si la valeur absolue est inférieure à 0,03 mm, le crâne peut être considéré en position horizontale ; si elle est supérieure à 0,03 mm, la hauteur de l'adaptateur doit être ajustée et les positions de Bregma et Lambda doivent être recalibrées jusqu'à ce que la valeur absolue de Lambda DV soit inférieure à 0,03 mm.

2.3.2 Déplacez le foret crânien au point médian de la ligne Bregma et Lambda et élargissez les côtés gauche et droit de 0,3 mm. Touchez doucement la surface crânienne et enregistrez les valeurs DV craniofaciales aux points gauche et droit respectivement. Si la différence absolue est inférieure à 0,03 mm, le crâne peut être considéré en position horizontale ; si elle est supérieure à 0,03 mm, la hauteur des deux barres d'oreille doit être ajustée jusqu'à ce que la différence absolue soit inférieure à 0,03 mm.

2.4 Percer un trou sur le crâne

2.4.1 Déplacez lentement la perceuse crânienne au-dessus du site cible. Allumez la perceuse crânienne, puis abaissez lentement la perceuse crânienne tout en observant le foret sous le microscope jusqu'à ce qu'il atteigne la dure-mère cérébrale.

2.4.2 Déplacez lentement la micro perceuse et percez deux petits trous à l'avant et à l'arrière de la région cérébrale cible. Insérez doucement les vis stériles dans le crâne avec un tournevis.

2.5 Implantation d'une canule d'administration de médicaments

2.5.1 Serrez la canule guide et déplacez-la lentement vers Bregma et réinitialisez le point zéro. Déplacez ensuite la canule de guidage au-dessus du site cible et descendez lentement vers la zone cible.

2.5.2 Appliquez la quantité appropriée de colle biologique sur l'ouverture du crâne.

2.5.3 Préparer le ciment dentaire semi-visqueux à remplir entre la vis et la canule de guidage, couche par couche, zone par zone.

2.5.4 Vissez fermement le capuchon de la canule guide une fois que le ciment dentaire s'est complètement solidifié.

2.6 Administration de médicaments avec canule

2.6.1 Utiliser le tube PE à travers la vis de fixation et remplir le tube PE et l'aiguille d'injection avec de l'huile minérale. Une fois la seringue remplie d'huile minérale, utilisez un pistolet à colle pour sceller la connexion entre le tube PE et la seringue et videz l'huile minérale dans la seringue.

2.6.2 Fixer la seringue dans le réservoir de propulsion du pousse-seringue. La pompe à seringue effectue la procédure d'aspiration et inhale le médicament à partir de la pointe de la canule d'injection.

2.6.3 Retirer la canule factice. Insérer la canule d'injection dans la canule guide

lentement et serrez la vis de fixation.

2.6.4 Laisser reposer pendant 1 min et permettre aux animaux avec tube d'injection de s'adapter à l'environnement.

2.6.5 Régler les paramètres d'injection de la pompe d'injection et exécuter la procédure d'injection.

2.6.6 Après l'injection, arrêtez l'injection pendant 1 à 5 minutes. Retirez ensuite le tube d'injection interne et resserrez à nouveau le capuchon du cathéter. L'injection est terminée.

2.7 Soins post-chirurgicaux

Gardez le rat au chaud pendant 24 h après la chirurgie. Injectez de la pénicilline ou d'autres antibiotiques pour prévenir l'infection et fournissez au rat une alimentation et une eau potable adéquates.

3 conseils

3.1 Lors du perçage de trous à l'endroit où les vis crâniennes sont encastrées, une attention particulière doit être accordée afin de ne pas percer à travers le crâne et d'éviter d'endommager les tissus cérébraux. En outre, l'emplacement de forage doit être maintenu aussi loin que possible de la zone d'implantation de la canule pour éviter le blocage de la vis crânienne.

3.2 Pour une implantation bilatérale, implantez d'abord la canule unique droite pour éviter l'obstruction spatiale.

3.3 Appliquer le ciment dentaire couche par couche pour solidifier l'implantation.