Manuel ou automatisé, lequel choisir pour le comptage de cellules ?

comptage manuel et automatisé des cellules

La culture cellulaire est une étape cruciale dans la recherche en biologie cellulaire. Pour assurer une croissance cellulaire saine et faciliter les expériences en aval, les chercheurs doivent déterminer la courbe de croissance cellulaire et comprendre leur état de croissance pendant la culture cellulaire, de sorte que la concentration, la viabilité et la concentration des cellules doivent être mesurées avant les expériences en aval. En règle générale, les méthodes de comptage des cellules comprennent le comptage manuel et le comptage automatisé.

Cet article présente les avantages et les inconvénients du comptage manuel des cellules et du comptage automatisé des cellules, ainsi qu'une introduction détaillée de ces deux méthodes.

Avantages et inconvénients de la cellule manuelle et automatisée

Compte

Méthode

Comptage manuel des cellules

Temps de comptage : 5 min/échantillon

Précision de comptage unique : faible

Analyse d'échantillon de cluster : calcul approximatif

Danger biologique :Oui

Calcul secondaire :Oui

Zone de champ visuel : 1 m². Mm

Gestion des données : Manuel

Coût des consommables : Faible

Coût de la main-d'œuvre : élevé

Compteur de cellules automatisé

Temps de comptage : 9sec/échantillon

Précision de comptage unique : élevée

Analyse d'échantillons de cluster : séparation précise

Danger biologique : Non

Calcul secondaire : Non

Zone de champ visuel : 3,5 mm².

Gestion des données : automatisée

Coût des consommables : Légèrement plus élevé

Coût de la main-d'œuvre : faible

Comptage manuel des cellules

Le comptage cellulaire manuel, développé par l'anatomiste et histologue français Louis-Charles Malassez au 18ème siècle, a longtemps été considéré comme l'étalon-or pour la mesure de la concentration cellulaire.

Procédure de comptage manuel des cellules par hémocytomètre

1 Récolter et colorer les cellules

Récolter la suspension cellulaire et tacher avec des colorants bleu trypan ou AO/PI.

2 Nettoyer l'hémocytomètre

Nettoyez l'hémocytomètre puis séchez-le à l'air libre ou utilisez un séchoir. Et vous pouvez également choisir des solvants organiques tels que l'éthanol à 95%, l'éthanol absolu ou l'acétone pour le déshydrater. Assurez-vous de ne pas frotter l'hémocytomètre avec quelque chose de dur.

3 Positionner la lamelle puis charger l'échantillon

Placez la lamelle appropriée sur l'hémocytomètre pour former une chambre de comptage. Pipettez une goutte de la suspension cellulaire sur le bord de la lamelle et laissez la suspension cellulaire s'écouler doucement et uniformément dans la chambre, en évitant les bulles.

4 Observation et positionnement au microscope

Trouvez un champ de vision approprié sous le microscope et observez l'échantillon de cellules. Ajustez la mise au point pour obtenir une vue claire et trouver le carré cible. Lorsque vous utilisez un colorant AO/PI, utilisez un microscope à fluorescence pour l'observation.

5 Comptage manuel au microscope

Regardez l'échantillon au microscope et comptez manuellement le nombre de cellules. Ce décompte est répété trois fois, en tenant compte des cellules de tailles différentes, et la valeur moyenne est prise.

6 Calculer la concentration

Calculer la concentration de cellules dans l'échantillon en utilisant la formule de conversion et les données enregistrées. Si la coloration au bleu trypan est utilisée, séparez les cellules vivantes des cellules totales.

7 Nettoyer l'hémocytomètre

Nettoyez l'hémocytomètre comme décrit ci-dessus et conservez-le pour une utilisation future.

Scénario d'application de comptage manuel des cellules

Comptage de cellules à faible débit

Remarques

● Le nettoyage occasionnel de l'hémocytomètre peut entraîner des risques biologiques.

● En raison du matériau de l'hémocytomètre, les rayures de surface peuvent sérieusement affecter les résultats expérimentaux.

● Les impuretés laissées derrière peuvent entraîner une répartition inégale des cellules.

● Les résidus d'agents de nettoyage peuvent affecter la viabilité des cellules.

● Quelques cellules groupées doivent être comptées comme une seule cellule, tandis que les échantillons avec plus de grappes doivent être remis en suspension et mesurés.

● Le principe de comptage des cellules pressées sur le quadrillage doit être déterminé à l'avance.

Comptage cellulaire automatisé

Bien que le tableau de numération des cellules sanguines soit considéré comme l'étalon-or pour le comptage des cellules, il existe des problèmes inhérents à sa conception et à son utilisation. Des compteurs de cellules automatisés ont été développés pour surmonter ces problèmes.

Il existe trois types courants de compteurs de cellules automatisés : les compteurs de cellules automatisés basés sur la vision, les compteurs de cellules de type Coulter et les cytomètres en flux.

Parmi ceux-ci, le compteur de cellules automatisé basé sur la vision produit des résultats similaires au comptage manuel, qui est désormais la référence, en raison de sa vitesse de comptage élevée et de principes similaires. Le compteur automatisé peut détecter les cellules et les particules, puis appliquer des algorithmes pour mesurer la concentration, la taille et d'autres paramètres des cellules. Cela permet de déterminer la concentration et le nombre d'ensemencement cellulaire, ainsi que la viabilité et la prolifération cellulaire.

Procédure pour le comptage automatisé des cellules

(1) Récolter et colorer les cellules.

(2) Charger l'échantillon sur une lame de comptage jetable.

(3) Insérez la lame dans l'instrument.

(4) L'instrument affiche immédiatement les résultats du comptage.

Applications de comptage cellulaire automatisé

Comptage cellulaire à haut débit.

Les compteurs de cellules automatisés peuvent être utilisés avec différents types d'équipements optiques et peuvent donc être mis à niveau vers des compteurs de cellules automatisés à fluorescence pour une double fluorescence AO/PI directe.

Remarques

(1) Les paramètres de comptage doivent être définis en fonction de l'échantillon.

(2) Le multiplicateur de prédilution doit être entré à l'avance.

(3) La précision de la mise au point automatique doit être vérifiée et tout écart doit être corrigé immédiatement.

Résumé

Le comptage manuel des cellules avec un hémocytomètre est souvent sujet aux erreurs. En outre, un nettoyage inapproprié de l'hémocytomètre peut présenter un risque biologique. En comparaison, le comptage automatisé des cellules est supérieur au comptage manuel des cellules en termes de précision des données et d'efficacité de la vitesse. En outre, la United States Pharmacopeia-National Formulary (USP-NF) recommande l'utilisation d'au moins deux méthodes ou plus pour déterminer la viabilité cellulaire après la récupération. En plus de la coloration au bleu trypan sur fond clair, la méthode de coloration AO/PI est couramment utilisée pour le comptage des cellules vivantes par fluorescence. Par conséquent, un compteur de cellules automatisé avec des capacités de fluorescence est plus pratique pour le comptage de cellules en fond clair et basé sur la fluorescence, ce qui le rend plus adapté aux scénarios de recherche actuels en biologie cellulaire.