Le WBP de Tow soutient la recherche à l'étranger : Les derniers progrès dans le traitement de l'asthme causé par l'allergie à l'armoise !

Une étude parue dans npj Vaccines a comparé la SLIT et la SCIT à base de rArt v 1 chez des souris asthmatiques. Elle couvre la conception, les résultats et le système WBP utilisé.

Article de recherche publié dans npj Vaccines le 2 avril

Titre : "Comparaison de l'immunothérapie sublinguale et sous-cutanée à base de rArt v 1 dans un modèle murin d'asthme"

Auteurs : Tabynov, K., Tailakova, E., Rakhmatullayeva, G. et al.

Cette étude a comparé l'efficacité et les mécanismes immunitaires de l'immunothérapie sublinguale (SLIT) et de l'immunothérapie sous-cutanée (SCIT) utilisant l'allergène majeur recombinant de l'armoise Art v 1 (rArt v 1) dans un modèle murin d'asthme. Des souris BALB/c ont été sensibilisées et traitées avec rArt v 1 SLIT, rArt v 1 SCIT (adjuvanté avec ISA-51), un extrait commercial de pollen d'armoise SLIT, ou PBS (contrôle). Les principaux résultats sont les suivants :

Efficacité : Les deux thérapies ont amélioré la pathologie pulmonaire et réduit l'hyperréactivité des voies respiratoires, mais la SCIT a été plus performante que la SLIT dans la suppression des réactions allergiques en phase tardive (par exemple, gonflement de l'oreille) et de l'inflammation pulmonaire.

Mécanismes immunitaires :

La SCIT a induit des réponses polarisées Th1 plus fortes (par exemple, IFN-γ élevé, rapports IgG2a/IgG1 accrus).

La SLIT a augmenté la production d'IgA au niveau des muqueuses mais a conservé la polarisation Th2 (dominance IgG1).

Sécurité : Le SLIT recombinant rArt v 1 n'a pas augmenté les niveaux d'IgE totales, alors que le vaccin SLIT commercial a augmenté le risque de sensibilisation.

Innovation : Première comparaison systématique entre SCIT et SLIT utilisant un seul allergène recombinant chez la souris, démontrant une protection croisée contre les extraits de pollen naturel.

Méthodes expérimentales

1. Clonage, expression et purification de l'art recombinant v 1

Clonage du gène : Le gène Art v 1 optimisé (GenBank ID PQ223694.1) a été inséré dans le vecteur pET28b en utilisant les sites de restriction NdeI/XhoI.

Expression et purification : Exprimé dans E. coli C41, induit par IPTG et purifié par chromatographie d'affinité métallique. L'expression de la protéine a été confirmée par SDS-PAGE et Western blot. L'élimination de l'endotoxine a permis d'obtenir une protéine pure à >95 % avec <5 EU/mL d'endotoxine.

2. Sensibilisation chez la souris et modèle d'asthme

Sensibilisation : Des souris BALB/c ont reçu une injection intrapéritonéale d'extrait de pollen d'armoise adsorbé à l'hydroxyde d'aluminium (1000 PNU) deux fois à 14 jours d'intervalle.

Induction de l'asthme : Défis allergènes par inhalation et instillation intranasale d'extrait de pollen. Du PBS a été utilisé comme contrôle négatif.

3. Protocoles d'immunothérapie

SCIT : Injections sous-cutanées de rArt v 1 + adjuvant ISA-51 (4 doses hebdomadaires, cumulées à 22 μg/souris).

SLIT : Administration sublinguale quotidienne de rArt v 1 (0,001-10 μg, 42 jours ; cumulatif 148 μg/souris) ou d'extrait de pollen commercial.

Contrôles : Positifs (souris sensibilisées traitées au PBS) et négatifs (souris non sensibilisées).

4. Évaluations immunologiques et pathologiques

Niveaux d'anticorps : IgE totales, IgG1, IgG2a et IgA spécifiques de l'art v 1 mesurées par ELISA.

Immunité cellulaire : Production d'IFN-γ dans les splénocytes après stimulation par le rArt v 1.

Test de gonflement de l'oreille : Épaisseur de l'auricule mesurée après l'exposition à l'allergène.

Hyperréactivité des voies respiratoires : Résistance des voies aériennes induite par la méthacholine évaluée à l'aide du système WBP-M de Tow (valeurs de Penh).

Histopathologie pulmonaire : la coloration H&E a permis d'évaluer l'inflammation péribronchique, l'infiltration d'éosinophiles et la métaplasie des cellules de gobelet (échelle de 0 à 7).

Résultats expérimentaux

1. Clonage, expression, purification et analyse de la protéine rArt v 1. (Figure 1)

La protéine recombinante rArt v 1 a été exprimée avec succès dans E. coli C41, avec une bande principale à ~23 kDa sur SDS-PAGE (plus faible que l'Art v 1 glycosylé naturel).

Le Western blot a confirmé la réactivité avec l'étiquette anti-His et les anticorps polyclonaux Art v 1 naturels, confirmant un repliement correct.

Figure 1

2. Comparaison des taux d'IgE totales entre les groupes et à l'intérieur des groupes, ainsi qu'en fonction du temps. (Figure 2)

SCIT a réduit rapidement et de manière stable les taux d'IgE, se rapprochant ainsi des témoins non sensibilisés. La SLIT a montré une suppression plus faible des IgE.

Le SLIT commercial a augmenté le risque de sensibilisation aux allergènes naturels.

Figure 2

3. Comparaison des taux d'IgG1, IgG2a et IgA spécifiques de l'allergène et de la production d'IFN-γ dans les différents groupes de souris. (Figure 3)

La SCIT a favorisé la polarisation Th1 (taux élevé d'IgG2a et d'IFN-γ), tandis que la SLIT a favorisé la production d'IgA au niveau des muqueuses (biais Th2).

La combinaison des voies Th1 (SCIT) et muqueuses (SLIT) peut améliorer l'efficacité thérapeutique.

Figure 3

4. Effets de différentes formes d'ASIT sur le gonflement de l'oreille induit par l'allergène, la réactivité des voies respiratoires et l'inflammation pulmonaire induite par l'allergène.（Figure 4）

Gonflement de l'oreille : SCIT a complètement supprimé le gonflement après le traitement, contrairement à SLIT ou au vaccin commercial.

Résistance des voies respiratoires : Tous les groupes ASIT ont réduit les valeurs de Penh à des niveaux de contrôle presque négatifs.

Pathologie pulmonaire : SCIT a minimisé l'inflammation (score : 1,6/7), tandis que SLIT et SLIT commercial ont montré des scores modérés (3,2-3,8).

Figure 4

Pléthysmographie du corps entier Tow-Int Tech

Au cours de l'expérience, les chercheurs ont utilisé le système de pléthysmographie du corps entier (WBP) de Tow pour évaluer l'hyperréactivité des voies respiratoires (AHR) chez les souris. Les résultats ont montré que tous les groupes ASIT (SCIT, SLIT et vaccin commercial) ont présenté une réduction significative de la résistance des voies aériennes (valeurs de Penh), atteignant des niveaux comparables à ceux du groupe témoin négatif. Ce résultat a fourni des données solides à l'appui des conclusions expérimentales.



Le système WBP utilise la pléthysmographie du corps entier sans contrainte, ce qui permet de tester la fonction pulmonaire et la réactivité des voies aériennes chez de petits animaux conscients et se déplaçant librement. Pendant la mesure, la respiration de l'animal induit des mouvements thoraciques qui modifient le volume de la chambre. Ces changements volumétriques sont détectés par un transducteur de pression, convertis en signaux électriques par un amplificateur et traités par un logiciel informatique pour générer des formes d'ondes respiratoires en temps réel et calculer des paramètres clés, notamment :

Le volume courant (Vt)

Débit expiratoire de pointe (DEP)

La fréquence respiratoire

Pause améliorée (Penh).

Félicitations à l'équipe du professeur Kairat Tabynov pour sa publication dans npj Vaccines

Le jour où leurs recherches ont été officiellement publiées dans npj Vaccines, nous avons eu l'honneur de recevoir une lettre de remerciement du groupe de recherche du professeur Kairat Tabynov. L'équipe a fait l'éloge de la précision et de la fiabilité du système WBP de Tow dans les tests d'hyperréactivité des voies respiratoires et a exprimé sa gratitude pour le soutien professionnel apporté par notre équipe technique.

Nous souhaitons sincèrement à l'équipe du professeur Kairat Tabynov de continuer à faire des percées dans le domaine de l'immunothérapie allergénique et nous attendons avec impatience leurs futures contributions à des innovations ayant un impact mondial ! Nous sommes impatients d'approfondir la collaboration avec le groupe de recherche pour faire progresser ensemble la traduction clinique des technologies de médecine de précision.

Références :

[1]Tabynov, K., Tailakova, E., Rakhmatullayeva, G. et al. Comparison of rArt v 1-based sublingual and subcutaneous immunotherapy in a murine model of asthma. npj Vaccines 10, 66 (2025). https://doi.org/10.1038/s41541-025-01112-1

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