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Tout ce qu'il faut savoir sur la qPCR à colorant

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Connaître les meilleures options

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La qPCR à colorant est une option rentable de qPCR qui mesure l'amplification de l'ADN double brin pendant la PCR (réaction en chaîne de la polymérase) sur la base de la détection de la fluorescence d'un colorant liant l'ADN. Outre le mélange qPCR, l'eau exempte de nucléase et l'ADN, elle ne nécessite que deux amorces spécifiques de la séquence, ce qui en fait une option rentable pour l'étude d'un grand nombre de cibles.

De nombreuses raisons expliquent la popularité de la qPCR à colorant auprès des scientifiques. En voici quelques-unes :

1. Coût (seulement 2 amorces) - une option plus économique que la qPCR à base de sonde.

2. Plus facile à concevoir que la qPCR à base de sonde. Encore une fois, vous n'avez besoin que de 2 amorces pour la première. La seconde nécessite 2 amorces et une sonde placée de manière très spécifique.

3. Il est possible de détecter des erreurs en plus du gène d'intérêt, contrairement à la qPCR à base de sonde. Il est donc possible d'optimiser l'expérience et d'obtenir de meilleurs résultats la prochaine fois.

Malheureusement, comme toute méthode, la qPCR à colorant n'est pas idéale pour tous les plans d'expérience. Voici quelques inconvénients :

1. Il n'est pas possible de faire du multiplexage.

2. La spécificité est faible.

La partie la plus importante de la qPCR à colorant est bien sûr le colorant. Le colorant classique et probablement le plus souvent utilisé est le SYBR® Green. Il existe cependant de meilleures options, qui ne sont peut-être pas encore aussi populaires, mais qui méritent d'être prises en considération. L'une d'entre elles est EvaGreen®, qui est spectralement similaire au vert SYBR®, de sorte qu'il n'est pas nécessaire de modifier les paramètres optiques lors de son utilisation. Les mélanges qPCR basés sur le colorant SolisGreen® ont une sensibilité élevée et des performances accrues (fluorescence plus brillante) avec une faible concentration de la cible, ce qui démontre une meilleure précision et moins de variance entre les réplicats techniques.