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Séquençage de nouvelle génération（NGS）Application scientifique

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Science des applications

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La technologie de séquençage à haut débit est largement utilisée dans les tests génétiques des tumeurs. D'une part, le séquençage génétique permet d'identifier les gènes mutés du cancer et donc de déterminer rapidement les médicaments ciblés ; d'autre part, le type d'échantillon peut être le sang du patient ou même la salive, ce qui élimine le besoin de sections pathologiques traditionnelles et réduit les dommages causés à l'organisme du patient pendant le processus de diagnostic. Nous allons ici présenter brièvement le processus de NGS dans l'application du test génétique des échantillons de tumeurs.

1、Réception des échantillons et contrôle de qualité

Exigences relatives aux échantillons de plasma : le volume de prélèvement sanguin pour le test ADNc doit être d'au moins 8mL et transporté au laboratoire central à l'aide du tube professionnel de préservation de l'ADNc BunnyTube conservé à température ambiante. Exigences relatives aux échantillons de paraffine tumorale (FFPE)

① tissu FFPE entier

② taille du tissu >0,5*0,5cm, découpez 5-10 feuilles de tissu en paraffine non coloré, épaisseur 2-5μm

③ taille de tissu <0,5*0,5cm, 10-15 feuilles nécessaires, transformées en sections ou directement stockées dans un tube EP de 1,5mL avec un contenu de cellules tumorales non inférieur à 10% et un tissu nécrotique non supérieur à 70%

La boîte de lames doit être marquée du nom, de la date de naissance et de la date de prélèvement, et conservée à température ambiante.

2、Extraction et fragmentation de l'ADN de l'échantillon

Différents kits d'extraction sont utilisés pour différents types d'échantillons afin d'extraire l'ADN requis, et l'ADN des grands fragments moléculaires est brisé en fragments de séquence courts d'une certaine longueur par fragmentation ultrasonique.

3、Préparation de la bibliothèque et enrichissement de la bibliothèque

Préparation de la bibliothèque : Les connecteurs préparés sont ajoutés aux fragments d'ADN extraits, puis les kits de sélection et de purification de l'ADN sont utilisés pour éliminer les grands et petits fragments d'ADN qui ne répondent pas aux exigences, ainsi que les connecteurs en excès et autres impuretés. Enrichissement de la bibliothèque : Les fragments d'ADN cibles sont sélectionnés par l'ajout d'oligonucléotides bloquants - hybridation moléculaire (ajout de sondes à capturer par hybridation avec la cible) - adsorption des sondes (ajout de billes magnétiques et donc adsorption des sondes) - sédimentation magnétique (capture des fragments cibles avec des aimants et élution des fragments hors cible).

4、Séquençage

5、Analyse bioinformatique et génération de rapports

Après la mise hors ligne des données de l'échantillon, le centre de calcul analyse les données en utilisant différentes méthodes d'analyse et de calcul selon les exigences des différents programmes expérimentaux. Un rapport spécifique est ensuite généré sur la base des résultats de l'analyse bioinformatique pour l'interprétation du médecin

Les produits de BunnyTeeth Technology sont développés et conçus spécifiquement pour le NGS et sont largement utilisés dans le test des oncogènes, le NIPT (dépistage prénatal non invasif) et le séquençage du macrogénome.