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Criblage de l'interaction de la bibliothèque de protéines humaines avec le PCa

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Criblage de l'interaction de la bibliothèque de protéines humaines dans le cas du cancer du poumon

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Principe de complémentarité des fragments de protéines Technologie PCA

Souvent, les protéines ne remplissent pas leurs fonctions de manière indépendante dans les cellules, mais interagissent généralement avec d'autres protéines pour former des complexes, de manière à remplir des fonctions spécifiques dans un temps et un espace donnés. La compréhension de l'interaction entre les protéines, en particulier le criblage à grande échelle et à haut débit de l'interaction protéine-protéine, puis la représentation de la carte du réseau de l'interaction protéine-protéine sont d'une importance irremplaçable pour révéler la fonction d'une protéine et enfin clarifier le mécanisme moléculaire de diverses activités vitales dans les cellules.

L'essai de complémentation des protéines (ACP) est une nouvelle technologie qui permet d'analyser intuitivement et rapidement l'interaction et la localisation des protéines dans les cellules vivantes. Le mécanisme de cette méthode est le suivant : seules les protéines ayant une structure complète peuvent remplir leurs fonctions. Cependant, lorsque la protéine fonctionnelle est divisée en deux moitiés N-terminal et C-terminal, aucune des deux moitiés ne peut jouer un rôle à elle seule, mais si elle est suffisamment proche dans l'espace, elle peut compléter et restaurer la fonction d'origine. Connecter les deux fragments inactifs aux extrémités N et C respectivement avec la protéine cible. Si les deux protéines cibles interagissent, les deux fragments de la protéine fonctionnelle segmentée seront proches l'un de l'autre dans l'espace et reformeront la protéine avec une activité fonctionnelle. La détection de l'activité permet de déterminer si la protéine cible interagit. Selon les besoins des différentes expériences, les protéines fonctionnelles utilisées pour l'ACP comprennent la luciférase et la protéine fluorescente.

Caractéristiques et avantages de la technologie PCA biologique de Meige

La bibliothèque PCA de l'entreprise comprend 18 000 protéines humaines, ce qui permet de cribler rapidement et facilement l'interaction entre les protéines dans les cellules humaines, ainsi que l'interaction entre les protéines pathogènes et les protéines de l'hôte humain. Sur la base de la technologie de complémentarité des fragments de protéines, l'entreprise a obtenu un brevet d'invention national pour le criblage à haut débit des interactions protéine-protéine, qui présente les caractéristiques et avantages suivants :

1. Détection directe et in situ des interactions protéine-protéine dans les cellules vivantes.

2. La sensibilité est suffisamment élevée pour détecter l'interaction protéine-protéine équivalente au niveau d'expression endogène.

3. Des interactions protéine-protéine transitoires et indirectes peuvent être détectées.

4. Grâce à un logiciel bioinformatique, nous pouvons facilement et rapidement générer les résultats de l'analyse de Shengxin et dessiner la carte du réseau d'interactions protéine-protéine

Étapes de la technologie biologique PCA de Meige :

1. Cloner le gène à tester dans le vecteur d'expression contenant la partie N-terminale de la protéine fonctionnelle pour construire le plasmide appât ;

2. Transformer le plasmide appât en cellules et sélectionner les cellules transformées ;

3. Le plasmide de la bibliothèque (contenant 18 000 gènes humains et cloné dans le vecteur d'expression contenant le C-terminal de la protéine fonctionnelle) a été transformé dans les cellules exprimant le plasmide appât ;

4. Criblage à haut débit et identification des protéines interagissant avec l'appât par cytométrie de flux ou par le système de rapport de la luciférase.

5. Les résultats de l'analyse bioinformatique donnent la liste des protéines interagissant avec les protéines d'appât.

6. Soumettre le rapport expérimental (y compris le processus d'opération expérimentale, les données et les graphiques), et soumettre la liste des protéines interagissant avec les protéines d'appât.

7. (facultatif) vérifier davantage la protéine interagissant avec l'appât par ACP ou immunofluorescence cellulaire ou immunocoprécipitation

Le client doit fournir le clonage du gène avec la séquence correcte et les informations pertinentes. Si le gène de la protéine appât est cloné dans la bibliothèque de la société, il n'est pas nécessaire de le fournir.

Cycle : le cycle de l'expérience de criblage de PCa de l'interaction entre chaque protéine et la bibliothèque est de 90 jours ouvrables.

Soumettre à l'achèvement du service :

1). Rapport de service technique (processus d'opération expérimentale, données et graphiques)

2). Liste des protéines interagissant avec les protéines appâts